Core facilities and technology platforms

Contact information

Institute of Biotechnology
Media Kitchen

P.O.Box 56
00014 University of Helsinki
Finland

Visiting address: Viikinkaari 9, room 4016, Biocenter 1

Riitta Ihamäki and Johanna Haukanniemi

Tel: +358 2941 59386
E-mail: elatusainelaboratorio [at] helsinki.fi

University of Helsinki Business
Identity Code: FI-03134717

flamma virtual desktop

Alma intranet

Biocenter Finland logo

 

Reseptit / Recipies — Elatusaineet

LB-AGAR
LB-MALJAT + HALUTTU ANTIBIOOTTI
LURIA-BACMID -MALJAT
ANTIBIOOTTISTOKKIEN VALMISTUS
ANTIBIOOTTILISTA
LB-MEDIUM
2 X LB-MEDIUM
M9-AGAR
M9-MEDIUM
SOB-MEDIUM
SOC 8
SOB-MG -MEDIUM PH 7,0
FSB ( FROZEN STORAGE BUFFER )
PB-MEDIUM / TB-MEDIUM
SOFT-AGAR
TOP-AGAR
TOP-AGAROSE
NZY AGAR
NZY+BROTH
BACTO TRYPTOSE PHOSPHATE BROTH
DMS-AGAR PH 5,7
DMS-MALJAT
YT-MEDIUM
2 X YT-MEDIUM

Back to Media Kitchen home page


LB-AGAR

Punnitaan komponenteista:

9 g Tryptone HISPANLAB H1612
4.5 g Yeast extract HISPANLAB H1702
13.5 g Agar HISPANLAB H1800
4.5 g NaCl RIEDEL 31434
  ad. 900 ml MilliQ H2O  

bullet Punnitaan kaikki aineet suoraan pulloon.
bullet Liuotetaan ja autoklavoidaan.
bullet Säilytys + 4° C:ssa.

Ready mixistä:
Punnitaan 35 g/l Hispanlab H 1083 Ready Mixiä, koostumukseltaan sama kuin komponenteista punnittu. Keitetään ja autoklavoidaan.

Takaisin ylös/ Back to top

Back to Media kitchen home page


LB-maljat + haluttu antibiootti

bullet LB-agar sulatetaan kattilassa.
bullet Jäähdytetään LB-agar vesihauteessa + 55° C:een.
bullet Lisätään tarvittava määrä haluttua antibioottia tarvitun konsentraation saamiseksi LB-agariin.
bullet Valetaan maljat.
bullet Litrasta LB-agaria tulee noin 40 maljaa.

Takaisin ylös/ Back to top

Back to Media kitchen home page


Luria-Bacmid -maljat

10 g Tryptone HISPANLAB H1612
5 g Yeast extract HISPANLAB H1702
12 g Agar HISPANLAB H1800
10 g NaCl (high salt) RIEDEL 31434
  ad. 1000 ml MilliQ H2O  

 

Antibiotic Stock conc. 300 ml 500 ml 1000 ml Final conc
Kanamycin 10 mg/ml 1,5 ml 1,5 ml 5,0 ml 50 µg/ml
Gentamycin 10 mg/ml 210 µl 350 µl 700 µl 7 µg/ml
Tetracycline 2 mg/ml 1,5 ml 2,5 ml 5 ml 10 µg/ml
IPTG 40 mg/ml 300 µl 500 µl 1 ml 40 µg/ml
X-Gal 20 mg/ml 1,5 ml 2,5 ml 5 ml 100 bulletg/ml

Takaisin ylös/ Back to top

Back to Media kitchen home page


Antibioottistokkien valmistus

bullet Kaikki antibioottistokit punnitaan ja liuotetaan vetokaapissa, suojakäsineet kädessä ja äärimmäistä huolellisuutta noudattaen.
bullet Antibioottistokkiliuokset valmistetaan liuottamalla antibiootti esim. ampicillin, kanamycin jne. milliQ-veteen ja steriilisuodatetaan 0,2 mm suodattimella.
bullet Antibiooteista; chloramphenicol ja erythromycin liuotetaan etanoliin, joten niitä ei tarvitse steriilisuodattaa. Liuotetaan juuri ennen käyttöä.
bullet Rifampicin -stokki valmistetaan liuottamalla N,N-dimetyyliformamidiin (RIEDEL 33120) tai dimetyylisulfoksidiin (DMSO) (ICN 190186). Liuotetaan juuri ennen käyttöä, ei steriilisuodateta. X-Gal valmistetaan liuottamalla N,N-dimetyyliformamidiin, ei steriilisuodateta.
bullet Kaikki antibioottistokit säilytetään –20°C:ssa. Gentamycin säilytetään +4°C:ssa.
bullet Huomiotavaa: maljat, joissa on antibiootteja tulee säilyttää +4°C:ssa. Maljat, joissa on tetrasykliiniä ja/tai X-Galia ja/tai IPTG:tä ja/tai zeociniä ja/tai G418:a säilytetään valolta suojattuna +4°C:ssa.


Antibiotic
Stock conc.
Standard Final conc
Company
Catalog number
Ampicillin
10 mg/ml
100 µg/ml
ICN
190148
100 mg/ml
Carbenicillin
10 mg/ml
100 µg/ml
DUCHEFA
C0109
Chloramphenicol
5 mg/ml
5 µg/ml
ICN
190321
Erythromycin
5 mg/ml
5 µg/ml
SIGMA
E-5505
G418/Geneticin
100 mg/ml
200 µg/ml
CB
345810
Gentamycin
10 mg/ml
7 µg/ml
DUCHEFA
G0124
IPTG
40 mg/ml
40 µg/ml
PROMEGA
V3951
Kanamycin
2 mg/ml
25 µg/ml
SIGMA
K-4000
10 mg/ml
Neomycin
20 mg/ml
5 µg/ml
SIGMA
N-6386
Rifampicin
10 mg/ml
100 µg/ml
ICN
195490
Spektinomycin
10 mg/ml
100 µg/ml
ICN
152067
Streptomycin
10 mg/ml
100 µg/ml
SIGMA
S-6501
Tetracycline
2 mg/ml
12,5 µg/ml
SIGMA
T-3383
X-Gal
20 mg/ml
100 µg/ml
FERMENTAS
R0402
Zeocin
100 mg/ml
100 µg/ml
INVITROGEN
45-0430

Takaisin ylös/ Back to top

Back to Media kitchen home page


LB-MEDIUM

Punnitaan komponenteista:

10 g Tryptone HISPANLAB H1612
5 g Yeast extract HISPANLAB H1702
5 g NaCl RIEDEL 31434
  ad. 1000 ml MilliQ H2O  

bullet Punnitaan kaikki aineet suoraan pulloon.
bullet Liuotetaan ja autoklavoidaan.
bullet Säilytys + 4° C:ssa.

Ready mixistä:
Punnitaan 20 g/l Hispanlab H 1231 Ready Mixiä, koostumukseltaan sama kuin komponenteista punnittu.

Takaisin ylös/ Back to top

Back to Media kitchen home page


2 x LB-MEDIUM

20 g Tryptone HISPANLAB H1612
10 g Yeast extract HISPANLAB H1702
10 g NaCl RIEDEL 31434
  ad. 1000 ml MilliQ H2O  

bullet Punnitaan kaikki aineet suoraan pulloon.
bullet Liuotetaan ja autoklavoidaan.
bullet Säilytys + 4° C:ssa.

Punnitaan 40 g/l Hispanlab H 1231 Ready Mixiä, koostumukseltaan sama kuin komponenteista punnittu.

Takaisin ylös/ Back to top

Back to Media kitchen home page


M9-AGAR

Liuos A:

7.2 g Na2HPO4 x 2 H2O J.TBAKER 0326
3.0 g KH2PO4 MERCK 4871
0.5 g NaCl RIEDEL 31434
1.0 g NH4Cl MERCK 1145
  ad. 500 ml MilliQ H2O  

bullet Säädetään liuoksen pH 7.4:ksi NaOH:lla tai HCl:lla (lähtöpH 6,9; 5 M NaOH ~2 ml)
bullet Liuos autoklavoidaan.

Liuos B:

15 g Agar HISPANLAB H1800
  ad. 500 ml MilliQ H2O  

bullet Liuos autoklavoidaan.
bullet Liuokset A ja B jäähdytetään + 55° C:een.

Liuokseen A lisätään aseptisesti seuraavat erikseen steriloidut liuokset.
CaCl2 lisätään kuumaan liuokseen pisara kerrallaan.

2 ml 1 M MgSO4 MERCK 5886
10 ml 20 % glucose ICN 194672
0.5 ml 1 % thiamine ICN 194749
0.1 ml 1 M CaCl2 MERCK 2382

bullet Liuokset A ja B yhdistetään ja valetaan maljat.

Takaisin ylös/ Back to top

Back to Media kitchen home page


M9-MEDIUM

7.2 g Na2HPO4 x 2 H2O J.T.BAKER 0326
3.0 g KH2PO4 MERCK 4871
0.5 g NaCl RIEDEL 31434
1.0 g NH4Cl MERCK 1145
  ad. 1000 ml MilliQ H2O  

bullet Säädetään liuoksen pH 7.4:ksi NaOH:lla tai HCl:lla (lähtöpH 6,9 ; 5 M NaOH ~2 ml)
bullet Liuos autoklavoidaan.
bullet Jäähdytetään + 55° C:een.

Litraan liuosta lisätään aseptisesti seuraavat erikseen steriloidut liuokset.
CaCl2 lisätään kuumaan liuokseen pisara kerrallaan.

2 ml 1 M MgSO4 MERCK 5886
10 ml 20 % glucose ICN 194672
0.5 ml 1 % thiamine ICN 194749
0.1 ml 1 M CaCl2 MERCK 2382

Takaisin ylös/ Back to top

Back to Media kitchen home page


SOB-medium

Punnitaan komponenteista:

20 g Tryptone HISPANLAB H1612
5 g Yeast extract HISPANLAB H1702
0.58 g NaCl RIEDEL 31434
0.19 g KCl RIEDEL 31248
2.03 g MgCl2 x 6 H2O MERCK 5833
2.46 g MgSO4 x 7 H2O MERCK 5886
  ad.1000 ml MilliQ H2O  

bullet Liuoksen pH:n tulee olla 6.8 - 7.8.(ei tarvitse säätää).
bullet Liuos autoklavoidaan.
bullet Säilytys + 4° C:ssa

Ready mixistä:
Punnitaan 30,7 g/l Hispanlab H 1541 Ready Mixiä, koostumukseltaan muuten sama kuin komponenteista punnittu, mutta MgCl2 puuttuu (magnesiumin määrä sama kuin reseptissä).

Takaisin ylös/ Back to top

Back to Media kitchen home page


SOC

500 ml SOB (autoklav.)  
10 ml 20 % glucose ( autoklav. ) ICN 194672

bullet Säilytys + 4° C:ssa.

Takaisin ylös/ Back to top

Back to Media kitchen home page


SOB-Mg -medium pH 7,0

20 g Tryptone HISPANLAB H1612
5 g Yeast extract HISPANLAB H1702
0.58 g NaCl RIEDEL 31434
0.19 g KCl RIEDEL 31248
  ad.1000 ml MilliQ H2O  

bullet Liuoksen pH säädetään 7,0:ksi 5 M NaOH:lla (~ 100ml).
bullet Liuos autoklavoidaan.
bullet Säilytys + 4° C:ssa

Takaisin ylös/ Back to top

Back to Media kitchen home page


FSB ( FROZEN STORAGE BUFFER )

10 ml 1 M KAc J.T.BAKER 0195
7.4 g KCl RIEDEL 31248
8.91 g MnCl2 x 4 H2O J.T:BAKER 0173
0.8 g Hexaminecobaltchloride FLUKA 52740
100 ml 0.1 M CaCl2 MERCK 2382
100.5 ml 99.5 % glycerol J.T.BAKER 7044
  ad. 1000 ml Steriili vesi KABI, NORGE 883314

bullet Säädetään liuoksen pH 6.4:ksi 0.1 M HCl:lla (varovasti pisaroittain).
bullet Liuos steriilisuodatetaan.
bullet Säilytys + 4° C:ssa.

Takaisin ylös/ Back to top

Back to Media kitchen home page


PB-Medium / TB-Medium

Liuos A:

12 g Tryptone HISPANLAB H1612
24 g Yeast extract HISPANLAB H1702
4 ml Glycerol J.T.BAKER 7044
  ad. 900 ml MilliQ H2O  

bullet Liuos autoklavoidaan.

Liuos B:

2.3 g KH2PO4 MERCK 4871
16.4 g K2HPO4 x 3 H2O MERCK 5099
  ad. 100 ml MilliQ H2O  

bullet Liuos autoklavoidaan.
bullet Yhdistetään liuokset A ja B.

Takaisin ylös/ Back to top

Back to Media kitchen home page


SOFT-AGAR
(uusi ohje (Savilahti), 1 g enemmän agaria)

8 g Tryptone HISPANLAB H1612
5 g Yeast extract HISPANLAB H1702
5 g NaCl RIEDEL 31434
8 g Agar HISPANLAB H1800
  ad. 1000 ml MilliQ H2O  

bullet Keitetään. Liuos autoklavoidaan.
bullet Säilytys + 4° C:ssa.

Takaisin ylös/ Back to top

Back to Media kitchen home page


TOP-AGAR

10 g Tryptone HISPANLAB H1612
5 g Yeast extract HISPANLAB H1702
5 g NaCl RIEDEL 31434
7 g Agar HISPANLAB H1800
  ad. 1000 ml MilliQ H2O  

bullet Keitetään. Liuos autoklavoidaan.
bullet Säilytys + 4° C:ssa.

Takaisin ylös/ Back to top

Back to Media kitchen home page


TOP-AGAROSE

10 g Tryptone HISPANLAB H1612
5 g Yeast extract HISPANLAB H1702
5 g NaCl RIEDEL 31434
7,2 g Agarose ICN 820721
  ad. 1000 ml MilliQ H2O  

bullet Keitetään, varo kuohumista. Liuos autoklavoidaan.Säilytys + 4°C:ssa.

Takaisin ylös/ Back to top

Back to Media kitchen home page


NZY AGAR

5 g NaCl RIEDEL 31434
2 g MgSO4´7H2O MERCK 5886
5 g Yeast extract HISPANLAB H1702
10 g NZ amine (Casamino Acids) BD 223040
15 g Agar HISPANLAB H1800
  ad.1000ml MilliQ H2O  

bullet Säädetään pH 7.5 NaOH:lla.
bullet Autoklavoidaan.

Takaisin ylös/ Back to top

Back to Media kitchen home page


NZY+Broth

10 g NZ amine (Casamino Acids) BD 223040
5 g Yeast extract HISPANLAB H1702
5 g NaCl RIEDEL 31434
  ad. <955ml MilliQ H2O  

bullet Säädetään pH 7,5 5 M NaOH:lla (~900 µl), täytä 955 ml:ksi.
bullet Autoklavoidaan.

Lisätään

12,5 ml 1M MgSO4
12,5 ml 1M MgCl2
20 ml 20 % Glucose

bullet Steriilisuodatetaan

Takaisin ylös/ Back to top

Back to Media kitchen home page


BACTO TRYPTOSE PHOSPHATE BROTH

2,5 g Na2HPO4 x 2 H2O J.T.BAKER 0326
20 g Bacto tryptose DIFCO 211711
5 g NaCl RIEDEL 31434
2 g Glucose ICN 194672
  ad.1000ml MilliQ H2O  

bullet Säädetään pH 7.3:ksi 5 M HCl:lla (~1 ml).
bullet Autoklavoidaan.

Takaisin ylös/ Back to top

Back to Media kitchen home page


DMS-agar pH 5,7
(Saara Lång)

100 g Sucrose J.T.BAKER 194747
1 pussi MS-salts SIGMA-M5524
  ad. 10 l MilliQ H2O  
80 g Bacto agar DIFCO 214010
bullet Sekoitetaan MS-suolat ja sakkaroosi keskenään. Säädetään pH 5,7:ksi laimealla NaOH:lla (2,5 M ; kuluu n. 1,5 ml)
bullet Jaetaan liuos 500 ml ja 1000 ml pulloihin, joihin on ensin punnittu 4 g tai 8 g agaria.
bullet Liuos autoklavoidaan.

Takaisin ylös/ Back to top

Back to Media kitchen home page


DMS-maljat

bullet Jäähtyneeseen agariin lisätään kanamysiiniä (varastoliuos SIGMA K-1377 50 mg/ml) haluttu määrä.
bullet Valetaan yleensä isoille maljoille (75 ml). Litrasta saadaan noin 12-13 maljaa. Maljoista tehdään mielummin paksumpia kuin liian ohuita.

Takaisin ylös/ Back to top

Back to Media kitchen home page


YT-MEDIUM

Punnitaan komponenteista:

8 g Tryptone HISPANLAB H1612
5 g Yeast extract HISPANLAB H1702
5 g NaCl RIEDEL 31434
  ad. 1000 ml MilliQ H2O  

bullet Punnitaan kaikki aineet suoraan pulloon.
bullet Liuotetaan ja autoklavoidaan.
bullet Säilytys + 4° C:ssa.

Takaisin ylös/ Back to top

Back to Media kitchen home page


2 x YT-MEDIUM

16 g Tryptone HISPANLAB H1612
10 g Yeast extract HISPANLAB H1702
10 g NaCl RIEDEL 31434
  ad. 1000 ml MilliQ H2O  

bullet Punnitaan kaikki aineet suoraan pulloon.
bullet Liuotetaan ja autoklavoidaan.
bullet Säilytys + 4° C:ssa.

Takaisin ylös/ Back to top

Back to Media kitchen home page